Carbohydrate-rich high-molecular-mass antigens are strongly recognized during experimental Histoplasma capsulatum infection / Antígenos de alta massa molecular ricos em carboidratos são fortemente reconhecidos durante infecção experimental por Histoplasma capsulatum

INTRODUCTION: During histoplasmosis, Histoplasma capsulatum soluble antigens (CFAg) can be naturally released by yeast cells. Because CFAg can be specifically targeted during infection, in the present study we investigated CFAg release in experimental murine histoplasmosis, and evaluated the host humoral immune response against high-molecular-mass antigens (hMMAg. >150 kDa), the more immunogenic CFAg fraction. METHODS: Mice were infected with 2.2x10(4) H. capsulatum IMT/HC128 yeast cells. The soluble CFAg, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, and IgG-hMMAg circulating immune complexes (CIC) levels were determined by enzymelinked immunosorbent assay, at days 0, 7, 14, and 28 post-infection. RESULTS: We observed a progressive increase in circulating levels of CFAg, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, and IgG-hMMAg CIC after H. capsulatum infection. The hMMAg showed a high percentage of carbohydrates and at least two main immunogenic components. CONCLUSIONS: We verified for the first time that hMMAg from H. capsulatum IMT/HC128 strain induce humoral immune response and lead to CIC formation during experimental histoplasmosis.

INTRODUÇÃO: Durante a histoplasmose, os antígenos solúveis de Histoplasma capsulatum (CFAg) podem ser liberados naturalmente pelas células leveduriformes. Considerando que os CFAg constituem um alvo específico durante a infecção, no presente estudo nós investigamos a liberação de CFAg durante a histoplasmose murina experimental, e avaliamos a resposta imune humoral do hospedeiro contra antígenos de alta MM (hMMAg; >150 kDa), altamente imunogênicos. MÉTODOS: Camundongos foram infectados com 2.2x10(4) leveduras de H. capsulatum, cepa IMT/HC128. Os níveis de CFAg solúveis, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, e também de imunocomplexos circulantes (CIC) IgG-hMMAgs foram determinados por ELISA nos dias 0, 7, 14 e 28 após a infecção. RESULTADOS: Após a infecção por H. capsulatum, observamos um aumento progessivo de CFAg circulantes, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, e também de CIC IgG-hMMAgs. Os hMMAg apresentaram alta porcentagem de carboidratos e, pelo menos, dois componentes imunogênicos. CONCLUSÕES: Mostramos pela primeira vez que os hMMAg de H. capsulatum cepa IMT/HC128 induzem resposta imune humoral e levam à formação de CIC durante a histoplasmose experimental.

High molecular mass fraction in clinical isolates of Paracoccidioides brasiliensis / Fração de alta massa molecular em isolados clínicos de Paracoccidioides brasiliensis

INTRODUCTION: Different serum levels of the IgG/IgE for Paracoccidioides brasiliensis high mass molecular (hMM) fraction (~366kDa) in the acute and chronic forms of the disease have been reported. Considering the nonexistence of hMM fraction investigation involving clinical isolates of P. brasiliensis, the present study aimed to investigate the presence of the hMM fraction (~366kDa) in cell free antigens (CFA) from P. brasiliensis clinical isolates. METHODS: CFA from 10 clinical isolates and a reference strain (Pb18) were submitted to SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) followed by gel image capturing and densitometer analysis. Additionally, CFA from 20 isolates and Pb18 were analyzed by capture ELISA (cELISA) using polyclonal (polAb) or monoclonal (mAb) antibodies to the hMM fraction. RESULTS: The presence of the hMM component was observed in CFA of all samples analyzed by SDS-PAGE/densitometry and by cELISA. In addition, Pearson's correlation test demonstrated stronger coefficients between hMM fraction levels using pAb and mAb (R = 0.853) in cELISA. CONCLUSIONS: The soluble hMM fraction was present in all the P. brasiliensis clinical isolates analyzed and the reference strain Pb18, which could be used as a source of this antigen. The work also introduces for first time, the cELISA method for P. brasiliensis hMM fraction detection. Analysis also suggests that detection is viable using polAb or mAb and this methodology may be useful for future investigation of the soluble hMM fraction (~366kDa) in sera from PCM patients.

INTRODUÇÃO: Diferentes níveis sorológicos de IgG/IgE contra a fração de alta massa molecular (hMM) (~366kDa) de Paracoccidioides brasiliensis têm sido encontrados na PCM aguda e crônica. Considerando a inexistência de investigação sobre esta fração em isolados clínicos de P. brasiliensis, o objetivo deste estudo foi investigar a presença da fração hMM (~366kDa) no preparado livre de células (CFA) de P. brasiliensis obtidos de isolados clínicos. MÉTODOS: CFA de 10 isolados e de cepa de referência (Pb18) foram submetidas à eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE) seguida de captura de imagem e análise por densitometria. Adicionalmente, CFA de 20 isolados e de Pb18 foram analisados por ELISA captura (cELISA) utilizando anticorpos policlonal (polAb) ou monoclonal (mAb) para fração hMM. RESULTADOS: A presença do componente de hMM foi observada em todas as amostras analisadas por SDS-PAGE/densitometria e por cELISA. Adicionalmente, o teste de correlação de Pearson demonstrou forte relação entre os níveis de fração hMM usando pAb e mAb (R = 0.853) no cELISA. CONCLUSÕES: Conclui-se que a fração hMM está presente em todos os isolados clínicos de P. brasiliensis analisados e no isolado referencial, sugerindo a possibilidade dos mesmos serem utilizados como fonte desta fração antigênica. Este trabalho também introduz pela primeira vez o método de cELISA para detecção da fração hMM de P. brasiliensis, sugerindo que detecção utilizando anticorpos polAb ou mAb é viável e essa metodologia poderá ser útil para investigação futura desta fração solúvel (~366kDa) em soros de pacientes com PCM.

Comparison of thin-layer chromatography, spectrofluorimetry and bright greenish-yellow fluorescence test for aflatoxin detection in corn

In this study the bright greenish-yellow fluorescence test, widely used by the corn milling industry, was compared to the thin-layer chromatography (TLC) and spectrofluorimetry methods for aflatoxin detection in 40 corn samples naturally contaminated by the Aspergillus section Flavi. According to the corn processing industry criteria, all the samples were adequate for human and animal consumption by the bright greenish-yellow fluorescence test, but TLC and spectrofluorimetry analysis detected aflatoxins above the maximum tolerated limit (20 µg/kg) in 7 and 8 samples, respectively. Aflatoxins were detected in 16 (40 percent) corn samples by TLC, with levels ranging from 4.0 to 54.0 µg/kg (mean 19.97 ± 15.97 µg/kg), and in 25 (62.5 percent) samples by spectrofluorimetry, with levels ranging from 1.0 to 58.66 µg/kg (mean 17.14 ± 17.81 µg/kg). The results indicated a good correlation (ρ = 0.97) between TLC and spectrofluorimetry for aflatoxin determination in naturally contaminated corn. The bright greenish-yellow fluorescence test was simple and quick, but it showed 20 percent false-negative results, suggesting its use only as screening method for detecting the suspected lots of grains that should be tested further for aflatoxin by more sensitive methods.

Neste trabalho a contagem de fluorescência luminosa amarelo-esverdeada, amplamente utilizada pela indústria de processamento de milho, foi comparada à cromatografia em camada delgada (CCD) e espectrofluorimetria para detecção de aflatoxinas em 40 amostras de milho naturalmente contaminadas por Aspergillus section Flavi. De acordo com os critérios da indústria processadora de milho, todas as amostras estavam adequadas para o consumo humano e animal pela contagem de fluorescência luminosa amarelo-esverdeada (CFLAE), porém as análises por CCD e espectrofluorimetria detectaram aflatoxinas acima do limite máximo tolerado (20 µg/kg) em 7 e 8 amostras, respectivamente. As aflatoxinas foram detectadas em 16 (40 por cento) amostras por CCD, com níveis variando de 4,0 a 54,0 µg/kg (média 19,97 ± 15,97 µg/kg) e, em 25 (62,5 por cento) amostras por espectrofluorimetria, com níveis variando de 1,0 a 58,66 mg/kg (média 17,14 ± 17,81 µg/kg). Os resultados indicaram uma boa correlação (ρ=0,97) entre CCD e espectrofluorimetria para detecção de aflatoxinas em amostras de milho naturalmente contaminadas. A CFLAE, apesar da simplicidade e rapidez, apresentou 20 por cento de resultados falso-negativos, sugerindo seu uso apenas como método de triagem para detecção de lotes de grão suspeitos de contaminação que devem ser avaliados posteriormente por métodos mais sensíveis.

Tópicos em patologia experimental / Topics in experimental pathology

Com o intuito de disseminar investigações no campo da Patologia Geral e Imunologia, este livro apresenta 13 capítulos de docentes orientadores em colaboração com alunos de pós-graduação (mestrado e doutorado), cujas linhas de pesquisa têm como foco central a verificação dos fenômenos patológicos, enfatizando os mecanismos imunológicos, moleculares e bioquímicos da lesão tecidual.

Imunoensaios: uma alternativa para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos / alimentosImmunoassays: an alternative for toxigenicfungi detection in foods

O monitoramento constante da contaminação fúngica é imprescindível para assegurar a qualidade e segurança dos alimentos, reduzindo as perdas econômicas, assim como os riscos à saúde humana e animal. Os métodos tradicionais de identificação e detecção de fungos (cultivo em diversos meios, exame microscópico e análises bioquímicas) geralmente consomem muito tempo e exigem pessoal com experiência. Os imunoensaios, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, constituem uma alternativa promissora aos métodos tradicionais devido à alta sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e potencial como método rápido de controle de qualidade. Dentre os ensaios imunoenzimáticos, aqueles baseados em exoantígenos são os mais empregados na resolução de problemas taxonômicos, detecção e identificação de fungos toxigênicos. Nesta revisão serão abordados conceitos básicos de imunoensaios, métodos de detecção de fungos, assim como diversos ensaios imunoenzimáticos para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos.

Constant monitoring of mould contamination is essential in order to assure the food quality and safetyand reduce the economic losses, as well as to minimize the potential hazards to human and animal health.The traditional methods for mould identification and detection (culture in several media, microscopicexamination and chemical analysis) are usually time-consuming and require trained staff. Immunoassays,particularly enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) could be a promising alternative to the traditionalmethods due to high sensitivity, specificity, reproducibility and potential for use in rapid quality control.Among ELISAs, those based on exoantigens are the most employed in the resolution of taxonomicproblems, detection and identification of toxigenic fungi. This review discusses the basic principles ofimmunoassays, methods of mould detection and the several ELISAs developed for toxigenic fungidetection in food

Paracoccidiodomicose em animais silvestres e domésticos / Paracoccidioidomycosis in wild and domestic animals

A paracoccidioidomicose é a micose sistêmica mais prevalente na América Latina, principalmente no Brasil. Apesar de existirem vários estudos sobre o diagnóstico e patologia dessa micose, pouco se conhece sobre a ecologia do agente etiológico Paracoccidioides brasiliensis. Seu habitat ainda não foi determinado, mas provavelmente o fungo vive saprofiticamente no solo. Há também pouca informação quanto a participação de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo e os isolamentos obtidos de animais como morcego e pingüim não foram reprodutíveis. Até o presente, o fungo tem sido isolado com maior freqüência do tatu, Dasypus novencinctus. Estudos soroepidemiológicos demonstraram que a infecção é freqüente em cães, principalmente da área rural e recentemente foi relatado o primeiro caso de paracoccidiodomicose natural em cão. O papel de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo ainda não está esclarecido.

Produção e caracterização de exoantígenos de Fusarium verticillioides / Production and characterization of Fusarium verticillioides exoantigens

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=F. moniliforme Sheldon) é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas. Este fungo pode causar perdas econômicas significativas para produtores e processadores de grãos, criadores de animais, além de representar sérios riscos á saúde humana e animal. Diversos métodos para a detecção de fungos têm sido utilizados, porém a maioria demanda tempo e pessoal treinado. Por outro lado, os métodos imunológicos, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, apresentam diversas vantagens para o emprego rápido em controle de qualidade. Neste trabalho, foram obtidos exoantígenos de 8 isolados de F. verticillioides para a produção de anticorpos policlonais. O perfil eletroforético dos antígenos apresentou bandas com massas moleculares aparentes variando entre 17 e 170 kDa. Os antígenos de 3 isolados (97K, 113F e 162A), tendo como base a concentração de proteínas e número de bandas, foram escolhidos para a produção de anticorpos policlonais. O soro imune anti-97K, com maior título no ELISA indireto (1:12.800), apresenta potencial para a imunodetecção de Fusarium verticillioides.

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=F. moniliforme Sheldon) is a primary corn pathogen and themain fumonisin producer. This fungus can cause significant economical losses for the farmers, grainprocessors, animal producers and risk for human and animal health. Several methods for mould detectionhave been used, however most of these are time-consuming and require trained staff. Otherwise,immunoassays (particularly enzyme-linked immunosorbent assay, or ELISA) provide several advantagesand potential for use in rapid quality control. In this work exoantigens from eight F. verticillioidesisolates were obtained for further production of polyclonal antibodies. The electrophoretic profile ofthese antigens showed protein bands with molecular mass ranging from 17 to 170 kDa. The antigens from3 isolates (97K, 113F and 162A) were selected for polyclonal antibodies production, based on proteinconcentration and number of bands. Antiserum against F. verticillioides 97K exoantigens, which showed thehighest titre in indirect ELISA (1:12.800), has potential for the immunodetection of F. verticillioides

Produção de anticorpos policlonais para lectina de hemolinfa de Anticarsia gemmatalis / Production of polyclonal antibodies for lectin from Anticarsia gemmatalis hemolymph

A lagarta de Anticarsia gemmatalis promove extensos danos na cultura da soja e seu controle é geralmente baseado na aplicação de inseticidas químicos. Devido aos riscos à saúde humana, animal e ao meio ambiente, métodos alternativos de controle tem sido desenvolvidos como o bioinseticida Baculovirus anticarsia. Há relatos de desenvolvimento de resistência em populações de A. gemmatalis submetidas, em laboratório, ao tratamento com baculovirus durante várias gerações. Os insetos apresentam mecanismos elaborados de proteção contra agentes infecciosos, como as lectinas, que atuam como moléculas de reconhecimento. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver anticorpos policlonais para lectina de A. gemmatalis. A atividade de lectina de hemolinfa de lagartas de A. gemmatalis foi avaliada frente a hemácias humanas, de coelho, camundongo, carneiro e boi de ensaio de hemaglutinação. Apenas as hemácias de bovino nåo foram aglutinadas pela lectina. As hemácias de coelho apresentaram maior reatividade com a lectina (1:512) e portanto os anticorpos policlonais foram produzidos em coelho imunizado com hemácias autólogas sensibilizadas com lectina. O anticorpo anti-lectina apresentou título de 1:8 em reação de precipitação em gel. Assim neste estudo foi possível produzir anticorpos para lectina de A. gemmatalis sem necessidade de emprego de técnicas dispendiosas de purificação.

Agrotóxicos: risco á saúde do trabalhador rural / Pesticides: risk to rural worker health

O objetivo desse artigo foi levantar fatores de risco de intoxicação por agrotóxicos a que os trabalhadores rurais estão expostos. É urgente que os profissionais envolvidos com atividades agrícolas adotem emdidas educativas e preventivas para minimização desses riscos. Os agrotóxicos são amplamente utilizados em diversas culturas de importância econômica, proporcionando a produção de alimentos a um preço acessível, porém a utilização indiscriminada destes podutos pode causar danos à saúde humana, animal e ao meio ambiente, principalmente em países em desenvolvimento, e.g. Brasil. As doenças ocupacionais e intoxicações acidentais são frequentes, devido á dificuladade na utilização de equipamentos de segurança. Há, também, o problema da dificuldade da maioria dos trabalhadores rurais, compreenderem as instruções quantoao uso seguro dos agrotóxicos, devido à baixa escolaridade. Assim, é necessário restringir o uso dos agrotóxicos mais perigosos, para reduzir os casos de intoxicação aguda, além de investir em programas preventivos de saúde

Produção e purificação de anticorpos policlonais para Salmonella Enteritidis (Enterobacteriaceae) / Production and purification of polyclonal antibodies for Salmonella Enteritidis (Enterobacteriaceae)

O objetivo deste trabalho foi produzir e purificar anticorpos policlonais específicos para Salmonella Enteritidis (Enterobacteriaceae). O anti-soro foi produzido em coelhos, empregando-se flagelina purificada. O título e a especificidade foram determinados através do ensaio imunoenzimático - ELISA e a purificação por cromatografia de afinidade com sepharose Proteína A. As suspensões bacterianas foram cultivadas em cinco diferentes meios de cultura (infusão de cérebro coração - BHI, caldo tripticase soja, caldo lactosado, caldo nutriente - CN e água peptonada). Observou-se que dependendo do meio o título do anti-soro pode variar e os melhores resultados foram obtidos com BHI e CN. O anti-soro foi específico para Salmonella Enteritidis, apresentando porcentagens de reações cruzadas com Salmonella Typhimurium, Salmonella Infantis e Salmonella Newport de 16,0, 11,9 e 6,4 por cento, respectivamente. Menores porcentagens foram obtidas com outras enterobactérias testadas. Esses resultados indicam a possibilidade da utilização desses anticorpos na padronização de ensaios imunológicos para a detecção de Salmonella Enteritidis

Contribuiçäo ao estudo da eco-epidemiologia do Paracoccidioides brasiliensis / Contribuition to the study of the ecoepidemiology of Paracoccidioides brasiliensis

A paracoccidioidomicose é unia micose sistêmica, que foi descrita pela primeira vez por Lutz, em 1908. Até o momento muitos progressos foram obtidos em relação à imunologia, patologia e diagnóstico, porém pouco se conhece sobre a ecologia do agente etiológico, Paracoccidioides brasiliensis. Assim, neste trabalho procuramos esclarecer alguns aspectos da eco-epidemiologia de P. brasiliensis. Inicialmente, avaliamos a possibilidade de utilização do cão como marcador epidemiológico de paracoccidioidomicose. Para avaliar a resposta humoral e celular a P. brasiliensis, cães foram imunizados com suspensão de células mortas do fungo. Os animais produziram anticorpos anti-gp43, e o pico da resposta ocorreu entre a 4ª e 5ª semana após a primeira dose. A inoculação de gp43 por via intradérmica em cães previamente imunizados com P. brasiliensis provocou reação de hipersensibilidade tardia. A reação apresentou induração e eritema, e o exame histopatológico da biópsia de pele demonstrou intensa reação inflamatória, com presença de células mononucleares e neutrófilos. Uma vez que cães imunizado com células de P. brasiliensis produziram resposta humoral específica contra gp43, foi realizado um estudo soroepidemiológico em cäes da regiäo Norte do Paraná. Os animais foram divididos em três grupos: cidade (n=54), constituído por cães de raça, saudáveis, com pouco ou nenhum acesso ao campo; periferia (n=213), formado por animais capturados na periferia, área considerada intermediária entre o meio urbano e rural; e rural (n=38), composto por cães de área rural. Foi utilizado o ensaio de ELISA indireto, com gp43 como antígeno. Os três os apresentaram reatividades diferentes, sendo que a maior positividade foi observada no grupo rural(89,47 por cento), seguido dos grupos periferia(48.82 popr cento) e cidade...(au)